国家标准计划《大豆茎溃疡病菌检疫鉴定方法》由 TC271（全国植物检疫标准化技术委员会）归口 ，主管部门为国家标准委。

主要起草单位 中国检验检疫科学研究院 、中华人民共和国杭州海关 、中华人民共和国黄埔海关 、中华人民共和国南京海关 、中华人民共和国宁波海关 。

大豆南方茎溃疡病最先于1973年在美国南部发现，随后在美国南部各州普遍发生，引起产量损失高达100％。

南方大豆茎溃疡病在植株各个生长阶段都能侵染。

受侵染的茎组织在溃疡部位易碎，表皮剥落，形成环形带。

受侵染的种子皱缩、变轻，外表白垩状。

发生在美国南方的大豆茎溃疡病，其茎部病斑比北方的要长，且多发生茎的一侧。

大豆南方茎溃疡病是北美和南美等大豆主产国家上主要的病害，蔓延迅速危害严重，损失巨大，可随贸易的调运广泛传播。

每年我国进口大量大豆，海关多年来曾多次截获该病菌。

目前我国只有大豆茎溃疡病菌检疫鉴定的行业标准，行标内的检疫方法是形态学和分子测序，没有分子PCR等快速检测方法。

中国检科院于2021年开始对该病菌研发试纸条等快速检测方法，同时将该有害生物列为国家十四五“生物安全关键技术研究重点专项”，研究开发快速精准的RPA荧光和试纸条分子检测新技术。

目前病菌的检测技术已有雏形正在完善。

本文件规定了大豆南方茎溃疡病菌的分离培养、形态学鉴定、分子生物学鉴定方法。适用于出入境海关、大豆产区等大豆种子和植株中的大豆南方茎溃疡病菌的检疫鉴定以及田间检测。 1.筛选 挑选干瘪、弱小、畸形的可疑种子、以及夹带的植物残体豆荚等。1%次氯酸钠中表面5 min，25℃保湿培养或APDA上培养。 2.形态学鉴定 观察菌落性状，子囊、分生孢子器、分子孢子的形状及大小等特征。 3.分子鉴定 CTAB方法或植物基因组提取试剂盒提取DNA。 常规PCR：特异性引物DPMF3/DPMR2。 实时荧光PCR:特异性引物DM1F/DM1R，探针DM1Pb。 RPA荧光法：特异性引物DmRPAF-F/ DmRPAF-R，探针DmRPAF-P。 RPA试纸条法：特异性引物DmRPA-F/ DmRPA-R，探针DmRPA-P。 3．鉴定特征 症状：大豆下部叶节附近出现红褐色小斑慢慢纵向扩展形成微凹陷、红棕色的溃疡斑，老熟溃疡斑边缘红棕色中心灰褐。受侵染的茎组织在溃疡部位易碎，表皮剥落，病斑较长，经常发生在植株的一侧，叶片表现叶脉间有褪绿和坏死症状。 形态特征：病菌的菌落白色，平展，有厚垣孢子呈褐色。子座形状不规则，长度-2~10(μm)，偶尔融合形成大子座。子囊壳黑色，球形，大小165～340μm×282～412μm，具长而突出的喙，长度为24～518μm，喙的基部宽160～400μm，顶部22～36μm。子囊无柄，子囊大小35.8~37.1×6.7~7.0(μm)，子囊孢子大小9.5~9.8×3.1~3.4(μm)。长棍棒形，子囊孢子透明，长圆至椭圆形，双细胞，分隔处稍缢缩，大小8~12μm×3~4μm。无性阶段拟茎点霉只产生α型分生孢子，孢子透明、单孢、梭形，两端含两个油滴，大小为2.1μｍ × 5.2μｍ。 常规PCR： 320FOR/320REV的扩增产物为270 bp。 实时荧光PCR： Ct值小于或等于35，阳性；Ct值大于或等于40，阴性；Ct值35~40之间，增加DNA用量2～10倍再次测试，如Ct值小于或等于35，判定大阳性，否则阴性。 RPA荧光法：待测样品在20min内出现扩增曲线，判定为阳性，否则阴性。 RPA试纸条：待测样品的试纸条在控制线和检测线均有条带，判定阳性，否则阴性。 4.结果判定 寄主症状和病菌形态与描述的一致，且常规PCR检测或荧光PCR检测或RPA检测为阳性，可判定为大豆南方茎溃疡菌。