国家标准项目《动物源空肠弯曲菌检测方法》由 TC181（全国动物卫生标准化技术委员会）归口 ，主管部门为农业农村部。

主要起草单位 扬州大学农业部农产品质量安全生物性危害因子（动物源）控制重点实验室 。

一、承担单位预研情况 2002年以来，课题组先后承担弯曲菌/空肠弯曲菌相关研究项目8项，在空肠弯曲菌毒力基因挖掘、流行病学、分子亚分型和候选疫苗等方面开展了较为系统的研究，分离、收集了5000余株不同源分离株，申请7项发明专利，发表科研论文30余篇，其中SCI论文10余篇。2009年-2015年连续4届参加在英国Aberdeen、加拿大温哥华、日本新泻和新西兰举行的弯曲菌工作组会议，课题组在会议上分别作了题为“运送空肠弯曲菌flaA基因的壳聚糖纳米DNA疫苗免疫生物学特性”、“不同来源空肠弯曲菌分子流行病学分析”的大会交流发言和墙报交流，与会专家对研究工作给予了充分肯定；相关研究工作获教育部高等学校科技进步一等奖和中国畜牧兽医学会学术年会优秀论文奖等。 在弯曲菌/空肠弯曲菌检测技术能力方面：首先，课题组所在单位是扬州大学测试中心（国家资质认定单位）食品中主要致病微生物检测室的重要成员，完全具备空肠弯曲菌现行国标GB 4789.9-2014（食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验）的检测能力。中心顺利通过每年空肠弯曲菌实验室能力验证计划。 在弯曲菌/空肠弯曲菌新型检测方法探索研究方面：优化了弯曲菌常规培养方法，通过生物信息学手段，建立了基于16S rRNA、mapA、ceuE基因检测弯曲菌的多重PCR定性检测技术（与本次申报的OIE标准一致），基于免疫酶标抗体阻抗型免疫传感器，以及含多种抗生素、生长促进剂的固体CCDA培养基，可直接用于食品中弯曲菌分离和定量检测（已获得发明专利ZL201010180516.0），建立了基于16S rRNA基因的弯曲菌定量PCR方法。从检测用试剂、程序和操作等方面进行优化，弯曲菌的快速定性、定量新型分子检测技术与国标法的符合率达94.8%－99.9%，而检测时间可以缩短1/2－2/3，工作强度降低，工作效率大幅度提高。应用建立的方法对我国人源、动物源、食品等弯曲菌流行状况进行了调查，共完成样品检测量20000余份，初步阐明了我国弯曲菌的流行现状。 另外，课题组所在的预防兽医学学科是国家级重点学科，拥有农业部农产品质量安全生物性危害因子（动物源）控制重点实验室、江苏省人兽共患病学高技术研究重点实验室和教育部工程研究中心，在技术装备、实验技术平台等方面能够满足本项目实施要求。 二、主要技术内容 转化OIE标准本方法，建立适用于动物以及动物产品中空肠弯曲菌的检测方法。申报标准涉及的技术方法研究成熟。该方法从样品采集开始，内容包括样品的运输，处理和保存，以及后期选择性分离以及鉴定空肠弯曲菌方法。 1、OIE技术方法的建立 严格遵照OIE相关文献资料，以标准株和国内分离株为参照，初步建立空肠弯曲菌的检测方法，并进行方法的优化。 2、OIE技术方法的本土化 根据国内分离株、试剂等进行检测方法的优化，包括样品的处理、检测流程、菌株的分离和鉴定、检测污染物的处理等。 3、空肠弯曲菌检测方法和程序的验证 将建立的检测方法与国内其它方法进行比对，包括现行国标方法、分子生物学方法、定性和定量检测方法等，并从敏感性、特异性等方面进行验证。 4、空肠弯曲菌检测方法的标准化 根据前述研究结果形成标准化的空肠弯曲菌检测方法，包括检测程序、试剂选择、操作要点和阳性、阴性对照等，并进行同行验证。

NO. 2014BAD13B02畜禽产品安全生产技术集成与示范（国家科技支撑计划）