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国家标准项目《猪瘟诊断技术 》由 TC181(全国动物卫生标准化技术委员会)归口 ,主管部门为农业农村部

主要起草单位 中国兽医药品监察所OIE猪瘟参考实验室

目录

基础信息

20191035-T-326
制修订
修订
项目周期
24个月
2019-03-28
公示开始日期
2019-01-03
公示截止日期
2019-01-18
标准类别
方法
国际标准分类号
11.220
11 医药卫生技术
11.220 兽医学
归口单位
全国动物卫生标准化技术委员会
执行单位
全国动物卫生标准化技术委员会
主管部门
农业农村部

起草单位

范围和主要技术内容

本标准规定了猪瘟(Classical swine fever ,CSF)临床诊断、病理学诊断样本的采集和处理和实验室诊断方法的技术要求,其目的是规范猪瘟的诊断技术,达到标准化程度。 猪瘟临床诊断主要包括猪瘟的临床诊断、病理学诊断技术。猪瘟实验室诊断方法分为病原学诊断技术和抗体诊断技术。病原学诊断技术主要包括兔体交互免疫试验、病毒分离技术、猪瘟病毒TCID50测定、标记抗体技术、抗原捕获ELISA(AC-ELISA)或双抗体夹心法和核酸检测技术;猪瘟抗体诊断技术包括猪瘟荧光抗体病毒中和试验和猪瘟酶联免疫吸附试验。 本标准适用于猪瘟的临床诊断、样本的采集和处理和实验室诊断。 根据猪瘟病毒(Classical swine fever Virus, CSFV)感染后猪瘟的病程长短、临床症状和病理变化,可将猪瘟分为最急性型、急性型和亚急性型、慢性型和持续感染等形式。依据典型的临床症状、病理变化可作出初步诊断,确诊需要通过实验室诊断。 猪瘟疑似样本的采集和处理规范了猪瘟样本的采集、保存与运输操作和样本的处理操作标准。 兔体交互免疫试验是对病料中是否含有活的猪瘟病毒的一种实验动物检测方法;猪瘟病毒分离技术是CSFV实验室检测与鉴定中常用的标准方法,通过在敏感细胞上进行活病毒的分离和鉴定,分离到的病毒可以用于基因分型及分子流行病学调查等进一步的研究工作,通过猪瘟病毒TCID50测定可确定分离的病毒的毒价;标记抗体技术可以对感染组织或细胞中的CSFV蛋白进行特异性检测,根据其标记物的不同分为荧光抗体检测技术(Fluorescent antibody test,FAT)和免疫过氧化物酶检测技术(Immunoperoxidase test,IPT),根据标记的抗体分子不同,可分为直接法和间接法两种;猪瘟病毒抗原捕获ELISA(AC-ELISA)或双抗体夹心法,用于检测猪瘟病毒抗原蛋白。该方法自动化程度高、操作简单,而且可以做到高通量;CSFV核酸检测技术较病毒分离技术、标记抗体技术和ELISA技术相比,检测灵敏度呈现数量级的提高,通过特异性引物和探针的设计实现了对CSFV目的基因的检测,还可实现野毒株和疫苗株的鉴别诊断诊断。 CSFV中和试验(Virus neutralization test, VNT)可以检测待检血清中的中和抗体,或病料中的CSFV。检测抗体的中和试验是将待检血清系列稀释后与固定量的CSFV混合,在适当条件下作用一定时间后,接种于宿主系统(敏感细胞、兔体或猪体),观察一定时间后,根据混合液中病毒的感染力来判定该血清对病毒的中和能力,并计算出待检血清的中和效价,从而进行血清学诊断。在敏感细胞上进行的中和试验称为体外病毒中和试验,如荧光抗体病毒中和试验(Neutralization-immunofluorescence,NIF)和过氧化物酶联中和试验(Neutralization peroxidase-linked assay,NPLA),通常使用的金标准方法为NIF和NPLA,均为国际贸易指定的CSF抗体确诊方法;;ELISA技术广泛用于CSF抗体的检测,而其中CSFV间接ELISA和阻断ELISA应用最为广泛,也是国际贸易指定的CSF抗体确诊方法。

国家级科研专项支撑

1.“十二五”农村领域国家科技计划课题 编号:2015BAD12B04猪瘟和猪伪狂犬病防控净化技术集成研究与示范 2.国家重点研发项目“畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发项目“ 子课题“猪瘟抗体化学发光检测技术研究” 3.国家标准“猪瘟抗体ELISA检测方法”的制定。

相关专利

1.猪瘟病毒荧光定量RT-PCR诊断试剂盒,专利号ZL200610109404,2009年; 2.猪瘟病毒TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR鉴别检测试剂盒,专利号:ZL200910242080.0, 2012年; 3.猪瘟抗体ELISA诊断试剂盒,专利号:ZL200810223406.0,2013年