国家标准计划《动物制品品种检测基因条码技术 Sanger测序法》由 TC387(全国生化检测标准化技术委员会)归口 ,主管部门为国家标准委。
主要起草单位 中国检验检疫科学研究院 。
| 07 数学、自然科学 |
| 07.080 生物学、植物学、动物学 |
动物制品经常出现成分的掺假造假和无意污染现象。
人为搀假主要是不法商要降低成本或增加品质,以谋取巨额经济利益,如市场销售的牛羊肉及肉制品中,很多都掺杂鸭肉,冒充牛羊肉进行销售,为弥补羊肉味不足,有的甚至掺入羊肉粉、羊肉精膏等添加剂来粉饰其掺假行为,市场上出现了名副其实的“挂羊头卖鸭肉”等严重掺假造假行为,拿鸭肉添加羊肉香精,制成羊肉去欺骗消费者,这既违反相关规定,更是一种商业欺诈。
这种掺假造假、以次充好的行为除了严重扰乱我国经济秩序。
另一个最主要影响是危害人体健康和畜禽安全,疯牛病和禽流感的世界性爆发和流行,人们越来越关注食品安全和饲料安全。
部分人群因为健康缘故也只食用素食部分。
此外,食品中的动物成分来源还涉及到消费者的宗教信仰,如穆斯林忌猪肉、印度教徒忌牛肉、素食者忌肉类等等。
有效的监管依赖于可靠的检测技术。
目前对动物制品的分子生物学检测方法主要为PCR和实时荧光PCR技术。
目前针对不同动物品种的检测方法有较多报道,许多已上升为标准。
但这些方法往往需要针对不同的物种设计引物探针,通量较低,而且对混合样品中未知的成分仍然难以判定,无法满足现实监管的需求。
基因条码是利用一段标准DNA序列作为标记来实现快速、准确和自动化的物种鉴定,类似于超市利用条形码扫描区分成千上万种不同的商品。
其技术核心是利用公认的通用引物扩增某基因区段,测序后通过数据库比对获得物种信息。
自2003年加拿大Herbert提出“基因条码(DNA barcode)”概念以来,一个全球统一的生物物种基因条码鉴定平台发展壮大,结合已有的NCBI基因数据库,为物种鉴定开创了新的时代,也给食品成分的真伪鉴别提供了新的工具。
2007年iBOL系统的建立为全球科学家提供了统一的物种鉴定平台,通过公认的通用引物对动物或植物编码基因进行序列测定,在iBOL或NCBI数据库中进行序列查询,实现对样品身份的准确鉴别。
为此我们建立了动物制品品种成分基因条码检测方法,针对公认的动物基因条码序列和引物(线粒体细胞色素C氧化酶亚基I,COI),制定了sanger测序方法标准流程,并已经在现实样品的检测中得到应用。
该项目将进一步将该标准流程上升为国家标准,为保障动物制品质量安全,保护消费者知情权和选择权,打击掺假造假违法行为,保护市场健康发展提供更好的技术支持。
本标准适用于肉及加工品、动物源性药材等动物制品中牛、羊、猪、鹿、马、驴、骆驼、狗、猫、貉、狐、兔、大鼠、小鼠等哺乳动物成分和鸡、鸭、鹅、鹌鹑等禽类动物成分的定性检测,方法的检出限为1%。 该技术基本操作过程主要包括以下几个步骤:样品的采集与处理;总DNA的提取;PCR扩增;PCR产物的纯化与克隆;测序;结果分析。其中测序的时候要求扩增目的条带单一才可以直接测序,不单一或弥散的条带必须割胶回收。进行Sanger法进行测序,获得DNA 序列后,通过NCBI比对判定物种来源。