国家标准项目《生化制品中还原糖的测定 柱前衍生高效液相色谱法》由 TC387(全国生化检测标准化技术委员会)归口 ,主管部门为国家标准委。
主要起草单位 中国测试技术研究院 、中国测试技术研究院生物研究所 、青岛科技大学 。
| 07 数学、自然科学 |
| 07.080 生物学、植物学、动物学 |
标准规定了用液相色谱-紫外法法测定生化样品中甘露糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的含量测定。 本标准主要技术内容: 方法原理:生化制品中还原糖经水提取,与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮在碱性条件下反应,生成糖衍生物,经液相色谱紫外检测器测定,外标法定量。 (1) 仪器条件: 色谱柱:Agilent XDB-C18,1.8 μm,3.0*100mm (2) 流动相:A相为含20 mM甲酸铵水溶液;B相为乙腈 (3) 流速:0.4 mL/min (4) 柱温:20℃ (5) 检测器波长:245nm (6) 进样量:10 μL; 标准曲线的制作: 分别称取各还原糖标准样品0.025g于25mL容量瓶中,纯水定容,混合标准溶液母液浓度为1000μg/mL。分别取0.05mL 、0.10mL 、0.25mL、0.5mL、1mL、2mL混合标准溶液母液定容至10mL容量瓶,配制成5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL标准溶液浓度系列。 试样的测定: 分别吸取待测试样和不同浓度的标准溶液各200μL置于15mL具塞试管中,加入1mol/L NaOH溶液100μL,0.5mol/L PMP衍生化试剂500μL,于70℃恒温水浴90min,冷却至室温,加入1mol/L HCl溶液100μL,减压蒸馏后加入2mL水溶解定容,再加入2mL三氯甲烷萃取,充分震荡、离心,弃去下层有机相,重复此操作2次,取上层水相1mL经0.45μm滤膜过滤用于HPLC分析。以峰面积为纵坐标,混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量。
2015年度国家科技支撑计划《科研用试剂产业链创新体系的构建》(编号2015BAK45B00)任务内容。