国家标准项目《植物中游离氨基酸的测定》由 TC387(全国生化检测标准化技术委员会)归口 ,主管部门为国家标准委。
主要起草单位 中国测试技术研究院生物研究所 、中国测试技术研究院 、中测测试科技有限公司 、四川中测生物科技有限公司 。
| 07 数学、自然科学 |
| 07.080 生物学、植物学、动物学 |
本标准规定了植物中游离氨基酸含量的测定方法,包括全自动氨基酸分析仪法(第一法)和高效液相色谱仪法(第二法)以及液相色谱-质谱/质谱法(第三法)三种方法。 本标准适用于茶叶、中药材、烟草等植物鲜样、植物产品中21种游离氨基酸含量的测定。 此处重点介绍补充方法液相色谱-质谱/质谱法(第三法)的主要技术内容: 方法原理:植物鲜样经冷水提取或植物产品经沸水浸泡提取,提取液经0.22μm尼龙滤膜过滤后直接进样,液相色谱-质谱/质谱仪测定,外标法定量。 样品处理: 针对植物鲜样,称取剪碎混匀的试样约2 g(精确到0.0001g)于80 ml离心管中,准确加入50 ml 4℃超纯水,15000 r/min下均质提取2min,4000 r/min下离心5 min,上层清液转移至250mL容量瓶中,再重复操作两次,合并三次提取液,用超纯水定容,混匀,取1ml提取液经0.22μm尼龙滤膜过滤后供液相色谱-质谱/质谱仪测定。针对植物产品,称取磨碎混匀的试样约2.0g(精确到0.0001g)于250mL锥形瓶中,加入200mL煮沸的水冲泡,95℃水浴加热,每隔5min摇匀一次,提取10min后取出,用布氏漏斗和滤纸趁热抽滤,并用20mL纯水清洗锥形瓶中残渣,滤液合并转移至250mL容量瓶中,冷却至室温后定容,混匀,取1ml样品溶液经0.45μm尼龙滤膜过滤后供液相色谱-质谱/质谱仪测定。根据样品中游离氨基酸的含量,必要时可以适当调整稀释倍数。 仪器条件: 色谱柱:ZORBAX SB-C18色谱柱,250 mm×4.6 mm(内径),粒度5μm或相当者 流动相:0.1%的甲酸水溶液和甲醇梯度洗脱; 流速:1.0 ml/min; 柱温:40 ℃; 进样量:10 μL; 离子源:电喷雾离子源(ESI源); 扫描方式:正离子模式; 检测方式:多重反应监测(MRM); 干燥气(N2)温度:350℃; 雾化气(N2)压力:25 psi; 干燥气流速:10.0 L/min; 喷雾电压:4000 V; 样品测定: 在仪器最佳工作条件下,用氨基酸混合标准工作溶液进样分析,以峰面积为纵坐标,混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量。