国家标准计划《核酸靶序列定量 qPCR法和dPCR 法的性能评价要求 》由 TC387（全国生化检测标准化技术委员会）归口 ，主管部门为国家标准化管理委员会。

主要起草单位 中国测试技术研究院 、中国计量科学研究院等 。

本标准等同采用ISO国际标准：ISO 20395:2019。

采标中文名称:生物技术—核酸靶序列定量方法性能的评价要求— qPCR和dPCR。

荧光定量PCR法和数字PCR法应用广泛，特定核酸序列（靶标）的定量分析市场需求巨大，同时特定核酸序列（靶标）的定量分析也有利于广泛的生物制造、生物科学研究和开发、工业生物技术、工程生物学和先进治疗行业等需要，通过检测和量化特定核酸靶标来证明产品质量的行业/科研领域。

核酸靶序列的定量分析是一项跨领域的基础测量手段，广泛影响生物科技的许多方面。

例如，在生物制药和工业生物技术领域，通过对核酸生物标志物进行量化以监测生物过程的效率和与设计参数的一致性；对细胞来源的高级治疗药物（ATMP）的纯度和质量进行检测；估算基因拷贝数，以评估基于基因的疗法的效力和有效性，以及用于基因编辑和工程生物学应用的过程控制分析。

聚合酶链式反应（PCR）这种技术由于其鲁棒性和简便性已经改变了整个核酸分析领域。

仪器技术的进步导致了基于PCR的核酸定量方法/仪器的广泛发展，例如：实时定量PCR（qPCR），提供了关于校准材料或独立样品定量DNA和RNA的能力；数字PCR（dPCR），提供了通过分子计数的概念进行SI溯源定量能力，而无需校准曲线。

然而，对核酸进行高质量的定量分析测定仍然具有挑战性。

例如，众所周知，不纯或降解的核酸提取物会影响定量的准确性。

同样，qPCR或dPCR测定法中由于设计不周导致较差扩增效率或低引物特异性将对定量准确性产生影响。

此外，标样/参考物质，标准曲线，数据归一化和处理等方面也可能对核酸靶标定量测量的准确性有很大影响。

本标准的研制有利于在特定测量流程的核酸靶标序列定量方面，提高获取数据的可信度、支持流程的选择和优化、提供可用于性能资质鉴定的关键性能参数。

具有更高可信度的生物技术和生物科学工业数据，能实现数据的互用，提升产品质量，减少风险和成本，促进国际贸易。

本标准规定了对特定核酸序列（靶标）的定量方法的性能评估和质量保证的通用要求。包括分析设计包括定量策略（在qPCR中利用校准曲线和在dPCR中通过分子计数量化核酸拷贝数，相对于独立样品的定量，比例测定）和对照品的使用； 总核酸质量浓度的定量和核酸样品的质量控制，包括核酸质量评估（纯度和完整性）；PCR分析方法设计、优化、计算机和体外的特异性测试； 数据质量控制和分析，包括验收标准、阈值设定和规范化； 用于qPCR和dPCR、具有特定需求的方法的确认（精度、线性度、定量范围、检出限、真实度和鲁棒性）；建立计量溯源和估计测量不确定度的方法。 本标准适用于数字PCR（dPCR）或实时定量PCR（qPCR）对DNA（脱氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）靶标序列的定量。适用的靶标序列核酸分子，包括双链DNA（dsDNA）如基因组DNA（gDNA）和质粒DNA；单链DNA（ssDNA）、互补DNA（cDNA）；单链RNA（ssRNA）包括核糖体RNA（rRNA）、信使RNA（mRNA）和长链和短链非编码RNA（微RNA（miRNA）和短干扰RNA（siRNA）等）；以及双链RNA。 本标准适用于生物来源（如病毒、原核和真核细胞）、无细胞生物流体（如血浆或细胞基质）；体外源头（如寡核苷酸、合成基因结构和体外转录（IVT）RNA）中提取的核酸。 本标准不适用于过短的DNA寡核苷酸（＜50碱基）的定量。 主要技术内容： 术语和定义；测量方法的设计；样品质控——总量、完整性和纯度；核酸靶序列定量的分析设计和优化；数据质量控制与分析；核酸定量方法验证；核酸定量测量的溯源性和可比性；qPCR和dPCR测量中的不确定度（MU）；报告要求。