国家标准计划《竹叶中多糖的检测方法》由 TC558（全国林化产品标准化技术委员会）归口 ，主管部门为国家林业和草原局。

主要起草单位 浙江科技学院 、中国标准化研究院 、中国林业科学研究院 、恩施州食品药品检验检测中心 、北京林业大学 、浙江省林业科学研究院 。

竹叶具有医疗和保健作用，主要是有多种功能性成分，除含有黄酮类化合物外，还含有增强免疫力和抗肿瘤作用的竹叶多糖等重要的生物活性成分，竹叶活性多糖，是竹叶中提取的天然多糖类生物活性物质。

竹叶多糖中含有相当数量的免疫活性多糖，组成的糖基主要有木糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖及半乳糖等。

具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、降血脂、降血糖、抗疲劳等功效，主要成分为中等分子量的酸性杂多糖。

竹子是多年生常绿植物，属可再生性资源，是当今世界上最具使用价值的植物之一，我国素有竹子王国之称，广泛分布在我国南方多个省、区的丘陵地带，近年来不断快速增长，资源十分丰富。

人们的衣、食、住、用、行等方面，都与竹子有密切的联系。

本项目中的竹叶是禾本科竹亚科各类竹子叶的统称，竹叶多糖检测方法标准的研究可加速揭示竹叶多糖的构成及生理功能，探索其作为新药品原料或食品添加剂资源的可行性，为竹叶废弃物的综合利用提供借鉴，为竹子这一我国特有的经济林产品增值做积极的探索，实现林业资源的高效利用，变废为宝，增加林业经济效益。

从竹叶中提取可作食品添加剂和药品原料的活性多糖，为相关非药用或食用植物性资源的有效开发和利用及天然化合物的研究提供思路，丰富天然产物资源及天然产物研究，将对我国林业经济的可持续发展产生积极的促进作用。

该标准的建立可为林业废弃物各类竹叶等的有效开发利用提供参考，为竹叶多糖开发为食品添加剂或药品原料的可行性提供标准检测方法的依据，为竹叶这一中国资源丰富的林业副产品的有效利用提供可靠的理论依据和技术支撑，增加竹叶这一林业产品废弃物的附加值，实现林业资源的高效利用，是当今解决农业、农村、农民的脱贫致富、产业转型升级的需要，是产品质量安全、农林产业的可持续发展、保护环境、清洁化生产和节约型社会紧迫的现实要求，该标准的制定为进一步规范农林废弃物的综合开发、资源节约、实现循环经济、保护环境、产品的质量、人类的健康生活等都具有重要的经济、社会和生态意义。

1.范围：本标准规定了竹叶中多糖含量的分光光度检测方法。本标准适用于竹叶中多糖含量的检测。 2. 原理 本研究以苯酚-硫酸为显色剂，用比色法测定竹叶中多糖的含量，多糖类成分在浓硫酸作用下，水解成单糖，单糖迅速脱水生成糠醛衍生物，糠醛与苯酚结合生成橙色衍生物，该衍生物在490nm处有最大吸收，其吸收值与糖的浓度成正比关系。该方法操作便捷，试验温度较低，显色稳定，灵敏度高，重现性好。 3.试剂和材料 3.1苯酚 分析纯 重蒸馏 3.2浓硫酸 分析纯 95% 3.3葡萄糖 99.9% 3.4无水乙醇 分析纯 3.5葡萄糖对照贮备液的配制 准确称取经105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水定容于100mL容量瓶中，即得浓度为1.0mg/mL的标准母液，准确吸取母液10mL定容到100mL，即配成浓度为0.1mg/mL的标准液。 3.6苯酚试剂的配制 准确称取苯酚12.5g，置于250mL棕色容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，置冰箱中备用。 4.仪器和设备 紫外可见分光光度计等 5.方法试验步骤 5.1多糖检测波长的试验 取对照溶液和供试溶液，分别经苯酚-硫酸试剂显色后，用紫外-可见分光光度计在400～800nm波长范围内作全波长扫描测定，确定最佳吸收波长。 标准溶液和样品溶液经硫酸-苯酚法显色后，在400~800nm波长范围内扫描，二者均在490nm处有最大吸收，且谱图一致，故选择490nm为多糖检测波长。 5.2检测样品的处理 准确称取竹叶60目磨碎样2.0000g，加100mL蒸馏水预浸1h，在80℃条件下提取3次，每次60min，提取液减压浓缩至10mL，加4倍于浓缩液体积95%的乙醇沉淀，静置过夜，离心取沉淀，沉淀定容到100mL备用。 5.3苯酚用量试验 分别准确吸取7份标准液1mL于7支20mL试管中，再在7支试管中分别加入1.0、1.4、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6mL苯酚溶液，加蒸馏水定容至3.6mL，摇匀，沿管壁迅速加入7mL浓硫酸，静置30min，涡流混匀，冷水浴冷却后，在490nm处测定吸光值，选择较适苯酚用量。 在保证浓硫酸过量的条件下，苯酚用量在1.0mL~2.0mL范围内，吸光值与苯酚用量呈正相关，且有线性关系；苯酚用量达到2.0mL时，吸光值出现最大值，后随着苯酚用量的增加，吸光值反而下降。因此，采用2.0mL的苯酚用量来测定多糖含量。 5.4浓硫酸用量试验 分别准确吸取7份标准液1mL于20mL试管中，再分别加入5%的苯酚溶液2.0mL，摇匀，沿管壁迅速加入4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、8.0mL浓硫酸，加蒸馏水定容至同刻度，摇匀，静置30min，涡流混匀，冷水浴冷却后，在490nm处测定吸光值。 在苯酚用量为2.0mL时，随着浓硫酸体积的增加吸光值相应增加，在7.0mL时出现最大值，后随着酸继续增加吸光值有所下降，因此，选定浓硫酸7.0mL下进行试验。 5.5加酸后放置时间的试验 分别准确吸取7份标准液1mL于20mL试管中，再分别加入5%苯酚溶液2mL，摇匀，沿管壁迅速加入浓硫酸7.0mL，分别静置5、10、15、20、25、30、40min，涡流混匀。冷水浴冷却后，在490nm处测定吸光值，以考察加酸后放置时间的影响。 随着放置时间的延长，吸光值逐渐增大，放置30min后这种变化趋于稳定，因此，反应时间定为30min较好。 综合以上分析，得出苯酚-硫酸法测定竹叶多糖的最佳条件为:苯酚2.0mL，浓硫酸7.0mL，加酸后放置30min，于490nm波长处测定吸光值。 5.6标准曲线制作 分别准确吸取葡萄糖标准母液1、2、3、4、5mL于5个50mL容量瓶中，加水定容至刻度后，各吸取1mL于20mL试管中，以1mL蒸馏水为对照，按苯酚2.0mL，浓硫酸7.0mL，加酸后放置30min，于490nm波长处测定吸光值检测。 5.7重现性试验 准确吸取7份标准应用液1mL，按以上条件进行苯酚-硫酸法检测，计算RSD。 5.8回收率试验 准确吸取0.5mL上述待测样品液5份，分别加入一定体积的葡萄糖标准液，按己确定的条件进行硫酸-苯酚法检测,计算多糖含量，按下式计算回收率。 加标回收率=（混合后测得多糖含量一样品中多糖含量）/葡萄糖标准品加入量×100% 6.分析结果的表述 样品中多糖的含量以质量分数w计，单位以克每百克（g/100g）表示，w=(m1×V1)/(m2×V2)×0.9×100% 7.精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的10%。

2017YFF0207800 主要农业废弃物提取加工与功效评价标准研究