注册

国家标准计划《植物源产品中左旋多巴的测定 高效液相色谱法》由TC387(全国生化检测标准化技术委员会)归口上报及执行,主管部门为国家标准化管理委员会。

主要起草单位 中国测试技术研究院生物研究所中国测试技术研究院

目录

基础信息

计划号
20184466-T-469
制修订
制订
项目周期
24个月
下达日期
2018-12-29
申报日期
2018-01-05
公示开始日期
2018-07-26
公示截止日期
2018-08-10
国际标准分类号
07.080
07 数学、自然科学
07.080 生物学、植物学、动物学
归口单位
全国生化检测标准化技术委员会
执行单位
全国生化检测标准化技术委员会
主管部门
国家标准化管理委员会

起草单位

目的意义

左旋多巴(L-DOPA)是一种非蛋白质氨基酸,化学名为β-3,4-二羟苯基-α-丙氨酸,是生物体内儿茶酚胺类激素、神经递质(如去甲肾上腺素、多巴胺)和黑色素的代谢前体,在临床上可用于治疗帕金森氏病、弱视、骨折、肝昏迷、心力衰竭等。

1913 年,瑞士生化学家 Marcus Guggenheim 从温莎豆中分离出左旋多巴。

1970 年,左旋多巴作为药物在美国获批上市,拉开了之后数十年作为抗帕金森病治疗的序幕。

2007年,左旋多巴在世界畅销药中排名第100名,2008年销售金额突破9000万美元。

经过近 50 年的发展,左旋多巴至今仍是治疗帕金森病最有效的药物。

目前,左旋多巴的生产方法主要有化学合成、植物提取、微生物发酵等途径。

虽然化学法合成多巴的途径有许多,但合成过程中需要大量的金属催化物,并且过程繁杂,产物的转化效率和旋光活性均较低,同时存在成本高、环境污染严重等问题。

利用微生物发酵法生产左旋多巴,其最终发酵产物含有许多不溶和可溶性杂质.必须采用适当的方法除去这些杂质,也存在过程复杂、技术难度高、回收率低、生产成本高等问题。

从植物中直接提取左旋多巴是目前的一种方法,研究表明植物中的多巴均为L-型。

猫豆、黎豆、狗爪豆、蚕豆等植物中均发现存在左旋多巴,且不同植物、同一植物不同部位中左旋多巴含量也存在差异,如蚕豆花中左旋多巴含量高达11.83%,是提取左旋多巴良好的原料来源。

因此,准确测定植物源样品及其制品中左旋多巴的含量对于高左旋多巴含量新品种选育、产品开发、品质鉴定、质量控制以及天然产物提取、药品开发等具有重要意义。

目前,国内外尚无测定植物源材料及其制品中左旋多巴含量的标准方法,《中国药典》(2015年版,二部)也仅规定了左旋多巴、左旋多巴片和左旋多巴胶囊中含量测定采用滴定法和紫外-可见分光光度法。

目前,有关左旋多巴含量测定的文献方法主要有紫外-可见分光光度法、薄层扫描法、毛细管电泳法、高效液相色谱法等,其中高效液相色谱法具有操作简单、灵敏度高、稳定性好等特点。

为此,本标准通过对样品前处理和色谱条件进行了优化,建立了植物源产品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法,填补了植物源材料及其制品中左旋多巴含量测定标准方法缺失的空白,为高左旋多巴含量新品种选育、产品开发、品质鉴定、质量控制以及天然产物提取、药品开发等提供技术支撑和保障。

范围和主要技术内容

本标准规定了植物源产品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法,适用于蚕豆、猫豆、黎豆、狗爪豆等植物源样品及其制品中左旋多巴含量的测定。 本标准主要技术内容: 方法原理:试样用盐酸超声提取后,经反相色谱柱分离,以保留时间定性,外标法定量。 样品处理:准确称取样品1.0 g(精确到0.0001g)于25 mL比色管中,加入20 mL 0.1 mol/L盐酸溶液,于60 Hz超声清洗器中超声提取20 min,冷却至室温后用0.1 mol/L盐酸溶液定容至刻度,混匀,过0.45 μm尼龙滤膜,供高效液相色谱仪测定。 仪器条件: a) 色谱柱: C18色谱柱,4.6mm×250mm,5μm,或同等性能的色谱柱。 b) 流动相:甲醇+10 mmol/L磷酸二氢钾溶液(2+98)。 c) 流速:0.7 mL/min。 d) 色谱柱温度:25 ℃。 e) 进样量:10 μL。 f) 检测波长:280 nm。 样品测定:将试样溶液注入高效液相色谱仪,依据保留时间定性,记录峰面积,根据标准曲线得到待测液中左旋多巴的浓度,平行测定次数不少于两次。